样本冷冻再检测，诊断研究怎样交代保存和解冻条件？

诊断研究常用既往留存的血清、组织或唾液样本评估新方法。若样本经历长期冷冻、运输和多次解冻，检测值可能与新鲜临床样本不同。稿件只写“采用冻存样本”不够；读者需要知道样本在何时、怎样被保存，以及这些条件是否在病例组与对照组之间一致。否则，准确性数字可能混有处理流程造成的差异。

把分析前流程写成可追踪记录

方法段先交代采样与新检测、参考标准各自发生的日期，采集管或保存介质、从采集到离心或固定的时间、保存温度、运输条件、最长保存时长和冻融次数。若某些资料无法从旧病历找回，明确写出未知比例，不要用“按标准流程处理”代替实际记录。不同中心处理步骤有差别时，给出中心规则和例外人数；若后来换过仪器、试剂批次或前处理方法，也应标注时间和样本归属。

自拟例子中，病例组的60份样本在零下八十摄氏度保存两年，对照组的60份样本只冷冻三个月。即便两组最终都做同一台仪器的检测，保存时长仍与疾病状态完全缠在一起。因为保存时间与病例身份一一对应，研究不能从这批资料单独分清疾病效应与保存效应。若有稳定性实验或同一样本新鲜与冻存配对测量，可单列证据；没有时，讨论中应明确这种差异可能影响外推，而不是声称储存“不会改变结果”。

把缺失样本和剔除规则放进流程图

报告进入样本库的总数、取得同意或使用许可后的可用数、因体积不足、破损、超出保存期限或不符合质控阈值而排除的数目。排除是否发生在知道参考标准结果之前也要说明。结果表可列各组保存时间的分布、冻融次数与检测失败比例；若样本不足以做分层估计，不要因分层不显著就宣布处理条件相同。诊断用途如果是现场即时检测，使用多年冻存样本得到的准确性还需额外验证其在真实使用场景的适用性。

STARD 2015解释文件在待评价检测方法项中要求足够详细的执行说明，举出的样本处理例子包括放冰、处理时限、冷冻温度和冻融次数。清单的目的在于帮助复现和评价适用性，并不替某一种生物标志物设定通用保存期限。样本稳定性要依据具体分析物、介质和检测方法判断，不能从别的指标照搬一个月数。

投稿前把样本台账与结果表逐项核对：各组时间分布、每份样本的冻融次数、失败和剔除原因、检测者是否知道疾病状态。若台账不全，诚实标出缺口，再缩小可支持的结论。至少应让读者看见，哪些样本冻了两年，哪些只冻了三个月。

参考信息：STARD 2015诊断准确性研究报告指南及其解释文件。