分选后细胞纯度如何核对，流式投稿怎样写？

流式分选论文写“获得高纯度目标细胞”，却只展示分选前的门控图。这张图说明了目标群如何被定义，并不能直接告诉读者收集管里有多少细胞真的属于目标群。分选过程还会受到液滴设置、样本状态和收集条件影响。若下游测序或培养结论依赖目标群的身份，应在稿件中把分选门控、分选后复检、纯度分母及回收量分别交代。

先写清目标群怎样定义

列出样本来源、染色抗体及克隆、活细胞排除策略、单细胞门、补偿或光谱解混方法和最终目标门。展示从全部事件到目标群的连续门控路径，而不是只给最后一张双色散点图。每一步的母群和事件数需要可追溯；若不同批次使用不同门，记录变更原因。MIFlowCyt报告标准把样本、仪器和分析信息放在同一复核链中，适合用来检查方法段是否遗漏关键条件。

分选后用收集物复检

从实际收集管取一小份细胞，在合适时间用流式重新分析，说明是否重新染色、是否沿用相同门控和补偿设置。复检样本数、取样比例和与正式分选样本的对应关系都要记录。若只有部分批次做复检，不能把其中最高纯度推广为所有批次。可把复检中的目标事件数除以可判读收集事件数作为纯度定义；先排除哪些碎片、死细胞或双细胞，须在分母前写清。不同排除规则下的百分数不可直接比较。

纯度和回收量回答不同问题

高纯度表示收集物中目标群比例高，不能据此推断原样本里的目标细胞大多被找回。相反，回收量大也可能伴随非目标细胞混入。可分别列出分选前目标事件数、仪器报告的分选事件数、收集后可用细胞数、复检目标比例及细胞活性。对于珍贵样本，说明复检取样和下游实验之间如何分配细胞，避免复检样本与最终分析批次脱节。分选性能原始方法研究正是把纯度、回收和仪器性能区分讨论。

下游结果与分选批次对应

若分选后做单细胞测序、培养或功能实验，把每个下游样本编码对应到分选日期、目标门、复检文件和纯度值。因复检低纯度而排除的样本也要说明数量和规则；不能只保留表现最好的批次。若未能进行分选后复检，应明确这一限制，并避免使用“已证实高纯度”之类超出记录的表述。对某个下游异常结果，可回看同批次的复检图和细胞活性，而非只依据整体平均纯度解释。

提交前抽查一支收集管，从分选前门控、仪器分选日志、分选后FCS文件追到下游样本编号。若这条链断开，先补映射或收窄细胞群身份的结论。纯度数字只有连着分母和实际收集物，才有可复核的意义。

参考信息：MIFlowCyt流式实验最低信息标准；流式细胞分选指南；Rmax分选性能原始研究。