流式投稿的单染对照与FMO对照，能互相替代吗？

多色流式细胞术稿件写“设有对照”，却没说对照是单染、未染色还是FMO。审稿人看不出荧光串色怎样校正，也看不出弱阳性群体的门界怎样确定。流式细胞术与细胞分选使用指南第三版把单染对照用于常规流式的补偿计算，把FMO对照用于观察其余颜色对某一通道门界的影响。两种对照回答的问题不同，投稿前应按实际实验目的和数据文件分别说明。

单染对照回答串色怎样处理

多种荧光染料的发射光谱会有重叠，一个标记的信号可能进入别的检测通道。常规多色流式分析需据此建立补偿：每份单染对照只含一个荧光标记，并有可比较的阴性和阳性事件，让软件估计该标记进入其他通道的信号。方法部分要交代使用了哪些单染对照、细胞还是补偿微球、何时采集，以及补偿矩阵怎样生成并应用到样本。只写“使用自动补偿”而没有对照来源，读者无法判断矩阵对应的是本次面板还是旧实验设置。

若抗体组合、染料或仪器设置在不同批次改变，不能默认一份补偿记录覆盖全部样本；应按真实采集批次交代矩阵和质控的对应关系。单染对照的作用是估计光谱溢出，它本身并不告诉读者某个弱表达细胞群的阳性门应放在哪里。补充材料中的单染图应标明标记和通道；只有“control1”这样的文件名，很难与主图逐一对应。

FMO帮助界定门界，但不替代单染

FMO即“缺一色”对照：保留面板中除目标标记外的其他荧光试剂。它能显示这些颜色在目标通道造成的背景和扩散，尤其可帮助判断弱阳性或连续分布群体的门界。举例说，一组细胞表达某标记很低，若只看完全未染色样本，无法看到其他颜色叠加后的扩散；相应FMO提供更接近多色面板的参照。但FMO不是用来计算每个染料串入其他通道的单染补偿对照，不能在稿件里把二者写成同义词。

一段自拟写法可以是：“各荧光标记分别采集单染对照，按本批仪器设置计算补偿；对弱表达标记另设相应FMO，结合预定门控规则确定阳性群体，并保存原始FCS和工作区文件。”这只是结构示范，真实稿件须列出具体标记、对照材料、采集批次及实际门控依据。若某项对照没有做，不能因为图上群体看起来清楚就补写“已设置FMO”。

投稿前从结果图倒查每一道关键门，再到实验记录找它依赖的对照、对应批次和补偿矩阵。把主样本、单染、FMO和未染色文件的编号放进内部对照表，核对正文、图注与补充文件说法一致。门控百分比的分母和原始FCS路径仍需另行说明；有了对照名称，并不等于报告链已完整。

参考信息：流式细胞术与细胞分选使用指南第三版；MIFlowCyt流式实验最小信息标准。