RT-qPCR 结果投稿前，怎样按 MIQE 核对引物、效率与对照？

RT-qPCR 图中出现两组“相对表达量”柱子，读者要知道的不只是星号代表什么，还要判断目标序列如何扩增、反应是否可靠，以及表达量相对于什么计算。准备投稿前，可以用 MIQE 2.0 的报告框架检查引物、扩增效率、对照与数据处理。MIQE 是帮助把实验写清的指南，不会替代原始实验验证；目标刊是否要求清单，也要看其作者说明。

引物不止写一个名字

方法或补充表应把靶标身份、引物序列、扩增片段和所用参考序列交代到可查。若使用商业预制检测体系，按产品可公开的信息和期刊要求报告，不能编造厂家未提供的序列。分析了多个转录本时，需说明检测设计针对哪一段；仅写“Gene X 引物见附录”却没有序列或可辨认的产品编号，读者难以判断测到的到底是什么。引物序列与文中基因符号还应逐项匹配，避免复制表格时错列。

扩增效率关系到定量结果。MIQE 2.0 把检测体系验证、效率、熔解曲线和数据处理列为应关注的部分。若用相对定量方法，方法段要说明 Cq 值怎样处理、选择了什么参考基因、为何适合本实验条件。不能因为某个基因常被称为“内参”就默认它在全部处理组中稳定。阴性对照、无逆转录对照等用于发现污染或基因组 DNA 影响，实际采用了哪些，应如实说明；没做过的控制不能在投稿时补写成做过。

从一张图反查计算过程

自拟核对场景：图 2 显示处理组相对表达量。编辑可从图注找到独立样本数，从方法找到 RNA 提取与逆转录流程，再从补充表找到两对引物及效率验证，最后从分析记录核对参考基因和归一化方式。若图中的“重复”其实是同一样本的多次孔位，不能把它们写成多份独立生物样本。这里需要说明真实实验单位，而不是套用固定数字。

MIQE 帮助作者找出会改变结果解释的实验细节。若旧实验缺少效率验证或对照记录，应先在实验资料中查找并评估哪些结论仍可支持；无法补证据时，对报告和解释作相应限制，不能凭一份看起来完整的清单追认实验。提交前将方法、图注、引物表和原始 Cq 文件的样本名核成同一套，读者才有可能复查表达量的来源。

写结果时也要避免把相对表达量说成细胞中绝对分子数。相对值取决于所选校准样本、参考基因与计算方式；图注若只写“fold change”，却没有说明相对于哪一组，读者无法理解纵轴。把该基准交代清楚，才不会让相同数值在不同实验间被误作直接可比。