Western blot内参与目标蛋白来自不同膜，图注怎样标？

目标蛋白和所谓“内参”来自两张不同的膜，排版时把条带上下拼在一起，图像看起来像常见的同膜归一化结果。问题不在能否拼图，而在第二张膜的信号不能证明第一张膜每条泳道经历了相同的上样和转膜条件。若不交代来源，读者会把不同实验的条带误认为同一膜证据。投稿前应先弄清两张膜的实验关系，再决定图注怎么写、定量是否还能成立。

设想实验员把同一批样本分装后跑了两块胶：一张测目标蛋白，另一张测 GAPDH。两次上样量、转膜效率、曝光范围都可能不同。即使泳道名称一一对应，也不能直接把第二张膜的 GAPDH 当作第一张膜的上样内参。Nature Portfolio 的图像规范要求上样对照与目标信号在同一膜；不同胶上的样本处理对照应标成处理对照，而不能悄悄代替上样对照。若目标期刊采用这一要求，应依据目标期刊要求补做同膜上样证据并重新分析；披露不同膜来源不能替代缺失的归一化依据。

先查原图和实验记录

逐项核对原始扫描、胶号、膜号、样本编号、泳道顺序、分膜或裁膜位置、抗体检测次序。目标蛋白与内参若确实来自同一张转印膜的不同区域，应保存能显示两部分位置关系的原图，说明切膜发生在何时及如何对应泳道。若是同一张膜先后剥离并重孵，也要写明检测顺序和剥离步骤，并检查信号残留或饱和是否影响定量。若两张膜只是平行实验，图中必须有可见分隔，图注直接标明不同膜，不能用排版掩盖边界。

图注把“展示”和“定量”分开写

图注至少说明各面板代表什么、样本或处理组、泳道顺序、图像是否裁剪及分隔线含义，并对应未裁剪原图。若图中的另一张膜只用于展示样本处理过程，应明确其角色，不称为目标蛋白的上样内参。定量图还要说明每个数值来自哪张膜、用什么信号归一化、独立生物学重复数以及比较是在同一膜内还是跨膜。跨膜定量比较通常风险更高；确实不可避免时，目标期刊的图像政策要求交代是否来自同一或平行实验，以及胶和膜是否并行处理。

不要用“实验做了三次”掩盖每次图像都缺少同膜归一化依据。可以回到原始数据，查看第一张膜是否保存了同膜总蛋白染色或其他预先认可的上样证据；其稳定性和线性范围也需要根据实验验证。若没有，不宜据两膜条带计算精确的目标蛋白与内参比值，更不能仅把不同膜的扫描强度相除后给出统计显著性。此时应重新实验，或把结论降到当前证据实际支持的范围。

提交前任选一张代表图，从成稿面板追到未裁剪扫描、膜号与定量表的一行数据。若无法解释某个比值的分子和分母为何可比，就先修正分析及图注；图注和原图应使读者能直接确认膜的来源与比较范围。

参考信息：Nature Portfolio《图像完整性与标准》；Nature Communications《Western blot指南》；《药理学实验中Western blot良好实践简要指南》。